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易瑞沙问题解答

印度易瑞沙对肿瘤细胞的抑制率的实验步骤

来源:www.teajl.com   作者:易瑞沙   日期:2015-04-28 14:04:41

印度易瑞沙对肿瘤细胞的抑制率的实验步骤:

(1)接种分别取处于指数生长期的肿瘤细胞,用含有10%胎牛血清的即印度易瑞沙或DMEM培养液稀释成20000个细胞/mL»

(2)培养 96孔板每孔中加入200队细胞悬液,置于37°C、5%C02培养箱 中培养24h。

(3)加药将特罗凯用DMSO溶解,每孔中加入设定浓度特罗凯,稀释至需 要的工作浓度。将西妥昔单抗用工作液溶解,每孔中加入设定浓度,稀释 至需要的工作浓度。

(4)孵育置于37aC、5%C02培养箱中分别培养72h。

(5)加印度易瑞沙用无血清RPMI640培养液配成5mg/mL溶液,每孔中加A 20\iL,置于37*C、5%C02孵箱中孵育4h。

(6)测定吸出上清,用培养液洗三次加入150pLDMSO溶解沉淀物,用振 荡器摇匀测定OD570值。

(7)计算按公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率:

公式:肿瘤细胞生长抑制率=(1 -实验组0D/对照组OD)xlOO%。

根据72h的实验数据,由0D值计算生长抑制率,将抑制率与药物浓度做图, 得出剂量反应曲线,计算出IC50(半数抑制浓度)值。

3、流氏细胞仪印度易瑞沙法检测细胞凋亡

根据凋亡早期细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸可以与Annexin V结合,死细胞的 细胞核可以与PI结合的原理,应用FITC和PI两种染料,可以去除死细胞的非 特异性干扰,清晰地判断凋亡细胞所占比例。


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